重组人胰岛素原料药N末端氨基酸序列的测定

doi:10.3969/j.issn.2096-3327.2020.12.021

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中国合理用药探索 ›› 2020, Vol. 17 ›› Issue (12) : 89-94. DOI: 10.3969/j.issn.2096-3327.2020.12.021

实验研究

重组人胰岛素原料药N末端氨基酸序列的测定

田沛霖;张国林;

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摘要

目的:建立重组人胰岛素原料药N末端氨基酸序列的测定方法。方法:基于Edman降解原理,重组人胰岛素原料药样品经1%乙酸溶液处理,采用PPSQ-53A蛋白质测序仪依序切割N末端氨基酸后,注入高效液相色谱仪,使用WakopakWakosil PTH-GR硅胶柱,通过梯度洗脱分离,流速为0.3 ml/min,柱温为35℃,进样体积为50μl,PDA检测器分析波长为269 nm。同时,采用PPSQ-53A蛋白测序仪进行等度洗脱分析N末端序列。结果:重组人胰岛素原料药N末端氨基酸理论序列:A链为Gly-Ile-Val-Glu-Gln-Cys-Cys-ThrSer-Ile-Cys-Ser-Leu-Tyr-Gln; B链为Phe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly-Ser-His-Leu-Val-Glu-Ala-Leu。经测定,样品梯度洗脱的测定结果与理论序列一致,等度洗脱获得的N末端序列也与理论序列一致。结论:所用方法操作简便、可行,能够用于测定重组人胰岛素原料药的N末端氨基酸序列。